ChIP-seq डेटा की सफाई

R में Bioconductor के साथ ChIP-seq

Peter Humburg

Statistician, Macquarie University

आम समस्याएँ

गलत तरीके से मैप हुई reads झूठे peaks दे सकती हैं.

  • Genomic repeats.

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आम समस्याएँ

गलत तरीके से मैप हुई reads झूठे peaks दे सकती हैं.

  • Genomic repeats.

  • अधूरी reference sequence.

R में Bioconductor के साथ ChIP-seq

आम समस्याएँ

गलत तरीके से मैप हुई reads झूठे peaks दे सकती हैं.

  • Genomic repeats.

  • अधूरी reference sequence.

  • Low complexity regions.

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R में Bioconductor के साथ ChIP-seq

Amplification Bias

  • कोशिकाओं से निकाले गए DNA fragments को sequencing से पहले कई बार कॉपी किया जाता है.
  • सभी fragments समान संख्या में कॉपी नहीं बनाते.
  • एक ही fragment की कई प्रतियाँ sequence हो सकती हैं.
  • एक अकेला DNA fragment coverage बढ़ा सकता है और गलत peak calls करा सकता है.
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Quality Control Reports

library(ChIPQC)
qc_report <- ChIPQC(experiment="sample_info.csv", annotation="hg19")
ChIPQCreport(qc_report)

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इनपुट फ़ाइलें तैयार करना

SampleID Factor Condition Tissue Treatment bamReads Peaks PeakCaller
S1 AR primary primary prostate tumor gleason score: 3+4=7 S1.bam S1.bed macs
S2 AR primary primary prostate tumor gleason score: 3+4=7 S2.bam S2.bed macs
... ... ... ... ... ... ... ...
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डेटा की सफाई

  • डुप्लिकेट reads हटाएँ.
  • कई hits वाली reads हटाएँ.
  • कम mapping quality वाली reads हटाएँ.
  • blacklisted regions में peaks हटाएँ.
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डेटा की सफाई

  • डुप्लिकेट reads हटाएँ.
  • कई hits वाली reads हटाएँ.
  • कम mapping quality वाली reads हटाएँ.
  • blacklisted regions में peaks हटाएँ.
R में Bioconductor के साथ ChIP-seq

डेटा की सफाई

  • डुप्लिकेट reads हटाएँ.
  • कई hits वाली reads हटाएँ.
  • कम mapping quality वाली reads हटाएँ.
  • blacklisted regions में peaks हटाएँ.
    • Blacklisted regions ENCODE प्रोजेक्ट से मिलते हैं.
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अभ्यास करते हैं!

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